DiD is a long-chain carbocyanine dye. Carbocyanine dyes are widely used as Di to label cells, organelles, liposomes, viruses and lipoproteins[2].

A crystalline solid

使用参考方案
1. Di 染色液的制备
1) 制备 DMF、DMSO 或乙醇储备液：储备液应在二甲基甲酰胺 (DMF)、二甲基亚砜 (DMSO 或 1-5 mM 的乙醇 DMSO。作为 Di 的溶剂，DMF 优于乙醇。储备液应立即使用。任何未使用的溶液需要等分并重新冷冻至少 -20℃。避免重复冷冻/解冻循环，溶液可保存6个月。
2) 准备工作液：将储备液稀释到合适的缓冲液中，如无血清培养基、HBSS或PBS，制成1~5 μM的工作液。我们不建议将水溶液存放超过一天。
注意：工作溶液的最终浓度应根据不同的细胞类型和/或实验条件根据经验确定。
2. 悬浮细胞
1) 1000g 4℃ 离心 3-5 分钟，弃上清。PBS 洗2次，每次 5 分钟。细胞密度为 1×106/mL
2) 加入1 mL Di 工作液，室温孵育 5-30 分钟。
3) 4℃，400 g 离心 3-4 分钟，弃上清。
4) PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。
5) 用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞。用荧光显微镜或流式细胞术观察
3. 贴壁细胞
1) 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
2) 取下盖玻片
3) 加入100 μL工作液，轻摇使之完全覆盖细胞，室温孵育 5-30 分钟。
4) 洗涤 2 次中等，每次 5 分钟。荧光显微镜或流式细胞术观察。

注射染色细胞两周后，在距内膜 15 至 40 μm 处发现了一个明亮的 DiD perchlorate (DiD) 阳性细胞。结果显示，染色强度逐渐降低的细胞簇逐渐出现，这与 DiD perchlorate 标记对细胞分裂的分配一致[3]。

冷藏运输

-20°C

665

633

[1]. Gan WB, et al. Multicolor "DiOlistic" labeling of the nervous system using lipophilic dye combinations. Neuron. 2000 Aug;27(2):219-25.
[2]. Kenji Yumoto, et al. A novel method for monitoring tumor dormancy using fluorescent dye DiD. Cytometry A. 2014 Jun; 85(6): 548–555.
[3]. Meng Li, et al. In Vivo Tracking of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells in a Rat Knee Osteoarthritis Model with Fluorescent Lipophilic Membrane Dye. J Vis Exp. 2017; (128): 56273.
[4]. Lo Celso C, et al. Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche. [Content Brief]

DMSO 中的溶解度 : 25 mg/mL
Methanol: soluble