目前比较流行的外泌体提取方法是超速离心法(差速离心和密度梯度离心)、尺寸排阻色谱(Size-exclusion chromatography,SEC)、聚合物沉淀法、磁珠免疫法等,方法各有优劣,大家可以根据自己的实际科研情况进行选择。下面对外外泌体的常见方法进行汇总,方便大家使用和参考。
超速离心法(差速离心和密度梯度离心):操作繁琐,耗时长,分离外泌体纯度较高,但得率低,目前分离外泌体主流方法。
尺寸排阻色谱(Size-exclusion chromatography,SEC):应用填充多孔聚合物微球的柱子,精确分离大小分子,操作简便,耗时短,分离外泌体纯度较高。
聚合物沉淀法:操作简便,耗时短,可能会同时分离非囊泡污染物(包括脂蛋白),分离外泌体纯度较低
磁珠免疫法:通过特定的抗体组合从样本中捕获不同类型的外泌体,免疫亲和技术具有高特异性、可获得高纯度的外泌体、且不影响外泌体形态完整等优点,是富集表征独特的外泌体的优选方法。但是此方法效率低,外泌体内含物的生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验的进行。组合方法:如聚合物沉淀法+SEC(CelGS Exo-spin 外泌体纯化试剂盒)纯化流程温和,无需高速离心,操作简便并且产物纯度高,分离出的外泌体完好无缺,适用于下游功能研究、WB验证、RNA分析等。
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